荧光定量PCR系统

生产厂家：伯乐生命医学产品有限公司

型号：BIO-RAD / CFX Opus 96

放置房间：开福校区飞凡楼肿瘤研究所319

操作说明：

1、开机：打开设备右后侧电源开关，然后打开电脑，待设备自检完毕，打开电脑CFX Maestro 软件，待软件左侧显示设备序列号，说明设备正常连接，此时设备会显示处于Idle模式。

2、在Maestro软件中选择 user-defined，进行温度设置和反应板设置。

3、点击 protocol，选择create new新建或者选 select existing来直接使用已保存的模板

4、新建protocol时，进入protocol Editor界面，根据实际情况对以下参数进行设置：反应体系、温度、时间、是否要求梯度、循环次数，是否需要熔接曲线等等。设置完成后点击NEXT，进行反应板设置。设置完成后，点击OK，保存protocol设置文件。

5、点击Plate，选择create new新建或者选择 select existing来直接使用已保存的模板

6、新建Plate时，进入Plate Editor界面，根据实际情况对以下参数进行设置：

1）在setting下 plate type中选择透明孔板还是白色孔板。

2）在 Scan Mode下选择扫描模式：SYBR/FAM通道检测/全部5个检测通道检测/FRET通道检测。染料法选择SYBR/FAM Only，多重探针选择All Channels。

3）在Select Fluorophores界面中选择需要的检测通道（可多选）。

4）选择检测的孔，并依次设置对应的孔的样品类型（未知样品、标准品、空白对照等）、待检测的靶标名称、样品名称、复孔数、标准品（如有）浓度梯度设置，内参基因、对照样品组等等。

7、设置完成后，点击OK，保存反应板设置文件。然后点击NEXT或者Start Run，进入确认界面。包括扫描模式确认、体系大小确认等。无误后，点击右下角Start Run，弹出结果文件保存对话框，选择结果文件保存路径。保存后，程序开始运行。

8、运行结束以后，软件会自动弹出结果分析界面，首先显示的是Gene Experiment板块，根据之前布板设计选择的内参基因和对照组，软件会自动计算不同样品靶标基因的相对表达量并制作柱状图。通过设置P值，软件会自动标注不同基因表达差异的显著性。

9、弹出的结果文件界面，除去最开始显示的Gene Experiment板块，从左往右依次是Quantification（扩增曲线、标准曲线展示和调节）、Quantification Date （Cq值相关的所有数据表）、Melt Curve（熔解曲线）、Melt Curve Date（熔解曲线数据表）等等。可以在对应的界面获取所需数据图片，或则调节参数来获取相应结果。

10、关机：使用完毕后，先在电脑上关闭软件，设备会从Idle模式返回初始界面，点右下角“shutdown”，待屏幕转黑并显示‘’可以安全关闭开关‘’后，再关闭设备电源开关。

注意事项：

1、要确保设备处于登出状态，才能连接软件。如果点击登录屏幕显示的账户（Admin、Guest、Service）任意一个，软件会显示因设备被某一账户占用，无法联机。

2、设置protocol时，要注意反应体系要与真实的体系体积一致，要确保延伸步骤要有读取信号的相机图标。

3、在CFX Opus实时PCR系统中只能使用低位板和低位管（高度≤16mm）。使用八连管时要注意位置对称平衡。

4、搬动设备时只能搬动设备左右贴的黄色标志的部分。远距离搬动设备时，需要将扫描头固定保护，可以联系工程师来操作。

5、放入反应槽的管子和板子，请注意板子的封膜完整且紧密，管子盖紧，防止反应体系蒸发到设备内部。不要直接用手触碰反应槽，避免手的油脂污染。

6、定期的清洁反应槽孔和对应的热盖孔的表面和边缘，避免这些位置的污染影响荧光的通过性。建议使用无水乙醇和无纺布棉签。

7、注意设备背面的风扇要避免被遮挡，注意防尘，防止PE手套等实验室用品挡住风扇口。

8、设备在开关盖的过程当中，不要用手推或者拉盖子，以免损坏。

9、使用完毕之后，需要将板子和8联管从设备中取出，并且一定要先等待程序运行完毕或者先终止程序之后再关闭设备电源开关。

（视频转自伯乐生命科学视频公众号）

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